Окраска мазков по Граму

Комплект реагентов Микро — ГРАМ — НИЦФ предназначен для дифференциально-диагностической окраски микроорганизмов путем последовательной обработки мазка, взятого из биологического материала человека (гной, мокрота, моча и др.), компонентами комплекта.

Один комплект рассчитан на проведение окраски 100 мазков.

Состав

1. генциановый фиолетовый карболовый, готов к применению —1 флакон (100 мл.)
2. фуксин основной карболовый концентрированный—1 флакон (10 мл.)
3. раствор Люголя, готов к применению— 1 флакон (100 мл)

Приготовление рабочего раствора фуксина

Внести в пробирку вместимостью 15 мл 1,0 мл фуксина основного карболового концентрированного (раствор фуксина ЦИЛЯ), добавить 9,0 мл дистиллированной воды и перемешать.

Полученный рабочий раствор фуксина (раствор фуксина Пфейфера) можно хранить при комнатной температуре(+18 -25°С) не более 24ч.

Проведение окраски

На фиксированный мазок наложить кусочек фильтровальной бумаги, на который налить избыток генцианового фиолетового карболового и выдержать при комнатной температуре (+18 -25°С) в течение 1 — 2 мин.

Снять бумагу, слить краску и, не промывая мазок водой, налить на мазок 0,7 — 1,0 мл раствора Люголя и выдержать мазок при комнатной температуре в течение 1 — 2 мин.

Слить раствор Люголя и, не промывая, погрузить стекло с мазком в стакан со спиртом этиловым 96°, покачивая стекло до тех пор, пока с мазка не перестанут отходить струйки краски (не более 30 сек).

Извлечь стекло с мазком из спирта, ополоснуть мазок дистиллированной водой, залить поверхность мазка раствором фуксина Пфейфера и выдержать мазок при комнатной температуре в течение 30 — 60 сек.

Слить краску со стекла, промыть мазок дистиллированной водой, высушить стекло с помощью фильтровальной бумаги или естественной сушкой в наклонном положении при комнатной температуре и провести микроскопию с использованием иммерсионной системы при увеличении X (900 — 1000).

Грамположительные микроорганизмы окрашиваются в фиолетовый или фиолетовый с синим оттенком цвет, грамотрицательные микроорганизмы — в красный цвет.

Условия хранения и эксплуатации

Срок годности фуксина Циля — 12 мес, генциан-виолета — 12 мес, раствора Люголя -6 мес.

Рабочий раствор фуксина основного (раствор фуксина Пфейфера) можно хранить при комнатной температуре не более 24 ч.

После вскрытия флакона генциановый фиолетовый и раствор Люголя можно хранить при комнатной температуре не более 6 мес.

Фуксин основной концентрированный (раствор фуксина Циля) после вскрытия флакона можно хранить при комнатной температуре в течение всего срока годности (12 месяцев).